Основа агара M17 – M17 Agar

Описание
Агар M17 рекомендуется в качестве улучшенной среды для роста и подсчёта молочных стрептококков и их бактериофагов.
Поскольку он поддерживает лучший рост хозяина, он позволяет продемонстрировать явления, обычно связанные с другими бактериальными вирусными системами, но ранее не описанные для молочнокислых стрептококковых фагов, и делает возможным детальное изучение морфологии и лизогении бляшек. Молочнокислые стрептококки требовательны к питанию и требуют сложной среды для оптимального роста. Их гомоферментативный характер продуцирования кислоты требует, чтобы среда была хорошо забуферена, чтобы pH культуры поддерживался выше 5,7 во время активного роста. Это поддержание pH важно, так как более низкий pH может привести к травмам и снижению выздоровления молочнокислых стрептококков.
Агар M17 содержит динатрий-глицерофосфат, который обладает достаточной буферной способностью для поддержания pH выше 5,7 активно растущих культур даже через 24 часа при 30 ° C. Этот буферный агент также позволяет добавлять кальций без образования осадочного комплекса. Кальцийсодержащая среда используется для анализа бактериофагов молочнокислых стрептококков.
Агар M17 также подходит для выращивания и поддержания заквасочных культур для производства сыра и йогурта, поскольку он не оказывает вредного воздействия на их последующую способность вырабатывать кислоту в молоке при температуре 30 ° C или 22 ° C.
Приготовление
Развести 48,25 г в 950 мл дистиллированной воды и осторожно довести до кипения. Стерилизовать автоклавированием при 121 °C в течение 15 минут. Охладить до 50 °C и добавть 50 мл стерильного раствора лактозы (10% мас./об.).
Для приготовленя раствора лактозы растворить 10 г лактозы LP0070 в 100 мл дистиллированной воды. Стерилизовать автоклавированием при 121 °C в течение 15 минут или мембранной фильтрацией через мембрану 0,2 мкм.
Методика
Для подсчета Streptococcus thermophilus в йогурте.
1. Смешайте или перемешайте образец йогурта для получения однородной однородности.
2. 10 ± 0,1 г исследуемого образца помещают в круглодонную центрифужную пробирку объёмом 200 мл, сделанную из упрочненного стекла.
3. Добавьте стерильный 0,1% (мас. / об.) раствор пептона к исследуемому образцу до тех пор, пока масса исследуемого образца и разбавителя не составит 50 г.
4. Приготовьте подходящую серию десятичных разведений суспензии йогурта в объёмах 9 мл стерильного 0,1% (мас. / об.) Раствора пептона.
5. (i) Засейте дублированные чашки с агаром M17 по петле из каждого разведения и распределите их, чтобы получить отдельные колонии.
5. (ii) Добавьте дубликаты аликвот разведения по 1 мл в чашку Петри и приготовьте чашки с 14 мл стерильного агара M17, охлажденного до 43 ° C ± 1 ° C.
6. Инкубируйте при 35 ° C в течение 48 часов.
7. Осмотрите чашки после 24 и 48 часов инкубации. Колонии Streptococcus thermophilus видны через 18-24 часа, а после 48 часов инкубации образуются колонии диаметром 1-2 мм. Lactobacillus bulgaricus не растут и не образуют очень ограниченных колоний.
8. Проведите подсчёт на чашках для разливки и выразите результаты как количество колониеобразующих единиц на грамм образца.
Условия хранения и сроки годности
Храните обезвоженную среду при температуре 10-30 °C и используйте до истечения срока годности, указанного на этикетке.
Приготовленную среду хранить при температуре 2-8 °C.
Внешний вид
Сухая среда: сыпучий порошок соломенного цвета.
Готовая среда: гель соломенного цвета.