Агар триптонный с солями желчных кислот - Tryptone Bile Agar

Триптонно-желчный агар разработан для обнаружения и подсчёта кишечной палочки в образцах пищевых продуктов.

Он имеет ряд преимуществ перед аналогичными методами:

1. Скорость обнаружения.
2. Менее вариабельный.
3. Обеспечивает лучшее восстановление из замороженных образцов.
4. Позволяет обнаружить анаэробные и плохо потребляющие лактозу штаммы.

Метод прямого посева (DPM), разработанный для обнаружения и подсчёта Escherichia coli в воде и образцах пищевых продуктов, основан на способности Escherichia coli синтезировать индол из триптофана при 44 °C при культивировании на мембране из ацетата целлюлозы на чашках с триптонно-желчным агаром.

Все индол-положительные штаммы дают чётко очерченные розовые колонии при «окрашивании» с использованием индольного реагента; колонии, не продуцирующие индол, имеют соломенный цвет.

Рост индолположительных организмов, отличных от Escherichia coli, подавляется избирательным действием солей желчных кислот и повышенной температурой инкубации.

«Окрашенные» мембраны можно «зафиксировать» сушкой под прямыми солнечными лучами или под люминесцентной ультрафиолетовой лампой низкого давления с фильтром типа «Вудса». При сушке интенсивность окраски усиливается.

Приготовление

Развести 36,5 г агара в 1 литре дистиллированной воды и осторожно довести до кипения до полного растворения. Стерилизовать автоклавированием при 121 °C в течение 15 минут. Остудить до 50 °C и разлить по 12-15 мл среды в стерильную посуду.

Методика

Метод прямого посева

1. Подготовьте чашки с триптонным желчным агаром и высушите поверхность.
2. Поместите фильтрующую мембрану из ацетата целлюлозы (диаметр 85 мм, размер пор 0,45 мкм), которая не должна быть стерильной, на поверхности среды. Осторожно разровняйте стерильным шпателем, чтобы удалить воздух.
3. Подготовьте образец пищи, разбавив 1:5 или 1:10 0,1% (мас./об.) стерильной пептонной водой CM0009, и гомогенизируйте.
4. Нанесите пипеткой 0,5 или 1,0 мл гомогената на мембрану и распределите по поверхности стерильным стеклянным шпателем.
5. Дайте гомогенату впитаться и инкубируйте чашки, уложенные стопкой не более трёх, крышками вверх в течение 18-24 часов в термостате с водяной рубашкой при 44 ± 1 °C.
6. Выньте планшеты из термостата и внесите пипеткой по 1-2 мл индольного реагента в каждую помеченную крышку.
7. С помощью пинцета снимите мембрану с планшета и опустите в реагент.
8. Поместите окрашенные мембраны под прямые солнечные лучи или под УФ-лампу на 5-10 минут. Индол-положительные колонии будут окрашены в розовый цвет.
9. Умножьте количество розовых колоний на коэффициент разведения и выразите результат как количество Escherichia coli на грамм пищи.
10. «Окрашенная» мембрана может быть «зафиксирована» продолжительной сушкой под прямыми солнечными лучами или под УФ-лампой.

Для приготовления индольного реагента смешайте 5% парадиметиламинобензальдегид в 1N соляной кислоте.

Условия хранения и сроки годности

Сухую среду хранить при температуре 10-30 °C и использовать до истечения срока годности, указанного на этикетке.

Приготовленную среду можно хранить при 2-8 °C.

Внешний вид

Сухая среда: сыпучий порошок соломенного цвета.

Готовая среда: гель светло-соломенного цвета.