Среда Клаузена – дитионит-тиогликолевая – Clausen Medium Dithionite-Thioglycollate (HS-T) Broth

Описание
Среда Клаузена – дитионит-тиогликолевая была разработана для тестирования на стерильность и утверждена Советом по фармакопее стран Северной Европы. Совет признает проблемы проверки стерильности путём отбора случайных образцов, и они называют этот процесс тестом на микробиологическое загрязнение. Стандартный тест на микробное загрязнение разработан исключительно для того, чтобы установить, что количество нестерильных единиц, если таковые имеются, в партии ниже определённого уровня.
Следующее описание стандартного теста на микробиологическое загрязнение было сокращено из подробного описания, опубликованного в качестве дополнения в Nordiska Farmakopenämnden.
Тесты должны проводиться с соблюдением всех мер предосторожности, чтобы предотвратить заражение в лаборатории чаще одного раза из каждых 100 тестов. Рекомендуется использовать шкафы с ламинарным потоком воздуха. Испытания должны проводиться квалифицированным и опытным персоналом, а эффективность используемых методов должна регулярно проверяться.
Следует изучить случайную выборку в количестве, достаточном для репрезентативности всей массы. В тесте на микробное загрязнение можно использовать два метода обнаружения нестерильных единиц.
Приготовление
Развести 40 г в растворе, состоящем из 3 г твина 80 (моноолеат полиэтиленсорбитана): 5 г глицерина и 1 литр дистиллированной воды. Довести до кипения, чтобы оно полностью растворилось.
Разлить по пробиркам или бутылям и стерилизовать автоклавированием при 121 ° C в течение 15 минут.
СРЕДА НЕЛЬЗЯ СТЕРЕЛИЗОВАТЬ ПОВТОРНО.
Методика
Метод с использованием мембранного фильтра
Исследуемое вещество растворяют или суспендируют в 200 мл 0,1% масс. / об. стерильной (pH 7,0-7,2) пептонной воды CM0009 и сразу фильтруют через один или несколько мембранных фильтров (средний диаметр пор 0,45 мкм или меньше).
Затем каждый фильтр промывают трижды, пропуская через мембрану 100 мл раствора пептона. После фильтрации мембраны переносят в пробирки со средой, содержащие не менее 15 мл среды Клаузена, и пробирки с триптон-соевым бульоном CM0129. Если используется только один фильтр, он делится на две части и две половины помещаются в отдельные трубки.
Пробирки со средой Клаузена инкубируют не менее 14 дней при 30–32 ° C.
Пробирки с триптон-соевым бульоном инкубируют не менее 14 дней при 20-25 ° C.
Метод разведения
Из каждого образца 1,0 мл материала или суспензии переносят в каждую из не менее 10 пробирок, содержащих минимальное количество 15 мл среды Клаузена.
Половину пробирок инкубируют при 30–32 °C в течение не менее 14 дней, а другую половину - при 20–25 °C в течение того же времени.
Если при инкубации среда становится мутной, необходимо как можно скорее отбирать субкультуры. Субкультуры также необходимо брать после нормальной инкубации и наблюдать в течение последующих 14 дней.
Оценка результатов
Стандартный тест на микробное загрязнение считается пройдённым, если рост не наблюдается ни в одной из пробирок. Если наблюдается рост, тест можно повторить с удвоенным количеством образцов. Затем тест считается пройдённым, если ни в одной из этих пробирок не наблюдается роста. Рост диагностируется по появлению помутнения в жидких или полужидких средах, по образованию колоний на твёрдых средах или по микроскопии образцов культур.
Условия хранения и сроки годности
Храните обезвоженную среду при температуре 10-30 °C и используйте до истечения срока годности, указанного на этикетке.
Приготовленную среду хранить в темноте при температуре не выше 4 °C не более 1 месяца.
Внешний вид
Сухая среда: порошок соломенного цвета.
Готовая среда: гель соломенного/жёлтого цвета.