Питательная среда с глутаматом натрия модифицированная - Minerals Modified Glutamate Medium Base +Sodium Glutamate LP0124

Модифицированная питательная среда с глутаматом натрия, по сравнению с бульоном МакКонк, обеспечивает обнаружение минимальных количеств бактерий группы кишечной палочки в образцах воды, благодаря улучшенному составу.

Недавно проведённые сравнительные испытания продемонстрировали превосходство использования модифицированной среды с глутаматом натрия для обнаружения Escherichia coli в воде по сравнению с лаурил триптозным бульоном для обнаружения небольшого количества Escherichia coli, хотя последняя среда давала более быстрые результаты (18-24 часа по сравнению с 48 часами, необходимыми для среды с модифицированным минералами глутамата).

Приготовление

Среда двойной концентрации:

Растворите 5 г хлорида аммония в 1 литре дистиллированной воды. Добавьте 22,7 г модифицированной минеральной среды и 12,7 г глутамата натрия LP0124. Перемешайте до полного растворения. Стерилизовать автоклавированием в течение 10 минут при 116 °C; в качестве альтернативы нагрейте до 100 °C в течение 30 минут три дня подряд.

Среда одинарной концентрации:

Растворите 2,5 г хлорида аммония в 1 литре дистиллированной воды. Добавьте 11,4 г модифицированной минеральной среды и 6,4 г глутамата натрия LP0124. Смешайте до полного растворения. Стерилизовать автоклавированием в течение 10 минут при 116 °C; в качестве альтернативы нагрейте до 100 °C в течение 30 минут три дня подряд.

Примечание

Для повышения стабильности сухой среды глутамат натрия LP0124 поставляется отдельно и должен быть добавлен к основной среде CM0607 в процессе приготовления.

Перед использованием убедиться, что стерильная среда имеет pH 6,7.

При необходимости процедуру нагрева следует отрегулировать так, чтобы конечный pH после стерилизации среды составлял 6,71.

Методика

Для предположительно чистой воды в среду следует засеять один объем 50 мл и пять объёмов по 10 мл.

Для воды более сомнительного качества следует использовать пять объёмов по 1 мл в дополнение к объёмам 50 и 10 мл.

Для загрязнённой воды могут потребоваться разбавления объёмом 1 мл, а объём 50 мл можно не использовать.

Большие объёмы воды (10 мл и 50 мл) добавляют к равным объёмам среды двойной концентрации, тогда как объёмы 1 мл (или их разведения) добавляют к 5 мл среды одинарной концентрации.

Пробирки инкубируют при 35 °C и анализируют через 18-24 часа. Все пробирки, в которых происходит образование кислоты (жёлтый цвет) и образуется газ в перевёрнутой пробирке Дарема, следует рассматривать как «предположительно положительные» пробирки. Далее пробирки следует повторно инкубировать и исследовать ещё через 24 часа. Все пробирки, в которых при повторном культивировании наблюдается образование кислоты и выделение газа, должны рассматриваться как «предположительно положительные».

Каждую «предположительно положительную» пробирку следует субкультивировать в пробирку с бульоном с желчью и бриллиантовым зелёным (2%) CM0031 и инкубировать в течение 24 часов при 44 °C.

В то же время пробирка с 1% триптонной водой CM0087 должна быть инокулирована для продукции индола через 24 часа при 44 °C.

Образование газа при потреблении лактозы при 44 °C и образование индола при 44 °C свидетельствует о присутствии Escherichia coli в образце воды.

Образцы хлорированной воды, дающие «предположительно положительные» результаты, должны быть проверены, чтобы исключить ложноположительные результаты из-за аэробных или анаэробных спороносных организмов, выделяющих газ. Субкультуры вносят в бульон с желчью и бриллиантовым зелёным (2%) и инкубируют при 35 °C в течение 48 часов. Выделение газа в течение 48 часов может считаться достаточным для подтверждения присутствия колиформных организмов.

Условия хранения и сроки годности

Сухую среду хранить при температуре 10-30 °C и использовать до истечения срока годности, указанного на этикетке.

Приготовленную среду можно хранить при 2-8 °C.

Внешний вид

Сухая среда: сыпучий порошок лилового цвета.

Готовая среда: раствор фиолетового цвета.