Бульон с метиловым красным для постановки теста Вогез Проскауэра (Среда Кларкса и Любса) - MRVP Medium (Clark and Lubs Medium)

Глюкозо-фосфатная среда с метиловым красным рекомендована для дифференциации бактерий группы кишечной палочки в рамках теста Вогез Проскауэра.

В основе теста с индикатором метиловым красным лежит способность микроорганизмов образовывать большое количество кислоты из глюкозы с падением pH ниже 4,4 с изменением окраски культуральной жидкости : pH < 4,4 красный: pH 5,0-5,8 оранжевый: pH > 6,0 жёлтый). Впервые среду с индикатором метиловым красным применили в своих исследованиях Clarks и Lubs.

Реакция с метиловым красным

Вогез и Проскауэр наблюдали красную флуоресцентную окраску, которая появлялась после добавления гидроксида калия к культурам некоторых организмов в среде с глюкозой. Было показано, что окрашивание происходит из-за окисления ацетилметилкарбинола с образованием диацетила, который реагирует с пептоном среды, давая красный цвет.

Дарем отметил, что Enterobacter aerogenes дает положительную реакцию, но Escherichia coli не окрашивает, и позже стало ясно, что существует отрицательная корреляция между тестами с метиловым красным и теста Вогез и Проскауэр для колиформных организмов, потребляющих лактозу.

Тест Вогез-Проскауэр

Приготовление

Развести 17 г сухой среды на 1 литр дистиллированной воды. Хорошо перемешайте, распределите по ёмкостям и стерилизуйте автоклавированием при 121 °C в течение 15 минут.

Методика

Засейте 10-миллилитровую пробирку со средой MRVP двумя полными петлями чистой, 4-6-часовой культуры исследуемого организма в пептонной воде CM0009.

Инкубируйте не менее 48 часов при 35 °C для МР-теста, или 3-5 дней при 30 °C.

После инкубации протестируйте одну порцию бульона с помощью 5 капель 0,4% (мас. /об.) раствора метилового красного и сразу же проверьте цвет на поверхности среды.

Вторую порцию бульона используют для реакции Вогез-Проскауэр одним из следующих способов:

1. Добавьте 3 мл 5% -ного спиртового раствора ????альфа-нафтола и 3 мл 40% -ного раствора КОН.
2. Добавьте 2 капли 0,3% раствора (мас/об) креатина и 5 мл 40% раствора КОН.

Ярко-розовый или эозиновый красный цвет появится после лёгкого встряхивания в течение 30 секунд. Розовый цвет - положительный; бесцветный - отрицательный.

Условия хранения и сроки годности

Сухую среду хранить при температуре 10-30 °C и использовать до истечения срока годности, указанного на этикетке.

Приготовленную среду можно хранить при 2-6 °C.

Внешний вид

Сухая среда: сыпучий порошок соломенного цвета.

Готовая среда: раствор соломенного цвета.