Добавка Новобиоцин к бульону EC

Новобиоцин - это антибиотик, который активен в отношении грамположительных бактерий, таких как Staphylococcus aureus (включая метициллин-резистентные штаммы) и других стафилококков. Некоторые грамотрицательные организмы, включая Haemophilus influenzae, Neisseria spp. и некоторые штаммы Proteus spp. также восприимчивы; однако большинство энтеробактерий устойчивы к его воздействию. Новобиоцин в первую очередь обладает бактериостатическим действием, но в более высоких концентрациях он может оказывать бактерицидное действие против более чувствительных видов. Он подавляет синтез ДНК, синтез РНК также подавляется, но в меньшей степени. Его действие на ДНК, в частности, связано с избирательным и конкурентным ингибированием связывания АТФ с субстратами гиразы B. Фермент гираза образует отрицательные суперспирали из замкнутой кольцевой двухцепочечной ДНК и ингибируется новобиоцином в низких концентрациях. Однако устойчивые к новобиоцину клетки Escherichia coli содержат ДНК-гиразу, на которую препарат не влияет. Новобиоцин также подавляет синтез белков и клеточных стенок.

EC Broth (с пониженным содержанием желчных солей) можно использовать для обогащения Escherichia coli O157 непосредственно из образцов пищевых продуктов, окружающей среды, замороженных образцов пищевых продуктов, где бактерии могут быть повреждены сублетально. Новобиоцин может быть добавлен для получения более селективной среды для первичного обогащения. Присутствие уменьшенного количества солей желчных кислот подавляет рост спорообразователей и энтерококков, но допускает рост Escherichia coli O157 при 37 °C.

При использовании пониженной температуры 37 ° C добавление добавки Novobiocin в конечной концентрации 20 мг/л снижает рост фоновой флоры без снижения роста Escherichia coli O157.

Приготовление

Растворите 18,3 г сухой питательной среды в 500 мл дистиллированной воды. Стерилизовать автоклавированием при 121 °C в течение 15 минут. Охладите бульон ЕС (с пониженным содержанием желчных солей) до 50 °C и асептически добавьте содержимое 1 флакона добавки Novobiocin, приготовленной в соответствии с инструкцией. Вылить в финальные стерильные контейнеры.

Методика

Приготовьте раствор образца 1:10 в бульоне ЕС (с пониженным содержанием желчных солей) с добавлением новобиоцина в соответствии с инструкцией. Смешайте в в течение 2 минут. Инкубируйте в течение 6 часов при 37 °C на роторном шейкере при 100 об / мин или в статическом режиме в течение 24 часов при 35 °C.

После инкубации разведите взбалтываемую культуру до 10², а культуру в ночном бульоне до 10⁶. Нанесите штрих на соответствующий селективный агар, например Агар МакКонки с сорбитолом CM0813 или CM0981. Селективная добавка к цефиксиму теллурита SR0172 может быть добавлена для повышения селективности любой среды.

Инкубируйте при 37 °C в течение 24 часов. Колонии Escherichia coli O157 должны выглядеть прозрачными и бесцветными. Подтвердите предположительное присутствие Escherichia coli O157 с помощью латексного теста на Escherichia coli O157 DR0620 или Dryspot Escherichia coli O157 DR0120.

ЕС-бульон (с пониженным содержанием желчных солей) и добавка новобиоцина рекомендованы USDA / FSIS и AIFST для обогатительного роста Escherichia coli O157: H7 и O157: NM в продуктах из мяса и птицы.

Условия хранения и срок годности

Сухую среду хранить при температуре 10-30 °C и использовать до истечения срока годности, указанного на этикетке.

Добавку Новобиоцин следует хранить в темноте при температуре 2-8 ° C. При правильном хранении добавка остаётся стабильной до истечения срока годности, указанного на этикетке.

Внешний вид

Сухая среда: сыпучий порошок белого цвета.

Готовая среда: раствор соломенного цвета.