Агар для определения ДНКазы – Vogel-Johnson Agar

Активность ДНКазы может быть использована для идентификации патогенных стафилококков после того, как они установили тесную корреляцию с производством коагулазы. ДНК включена в агаровую среду, чтобы обеспечить простой метод определения активности ДНКазы. Организмы наносят штрихами на поверхность агаровой среды и инкубируют. Затем рост на поверхности агара заливают 1 н. Соляной кислотой. Полимеризованная ДНК осаждается в присутствии 1 н. HCl и делает среду непрозрачной. Если организмы производят ферменты ДНКазы в количестве, достаточном для гидролиза ДНК, вокруг колоний видны чистые зоны.

При тестировании штаммов Staphylococcus aureus из клинических образцов была показана хорошая корреляция между продукцией ДНКазы и активностью коагулазы. Как Staphylococcus aureus, так и Staphylococcus epidermis продуцируют внеклеточную ДНКазу, но золотистый стафилококк производит большее количество.

Модификация среды заключается в добавлении маннитола (1% мас./об.) и фенолового красного или бромтимолового синего (0,0025% мас./об.) в качестве индикатора ферментации маннитола. Прежде чем залить кислоту в чашку, необходимо определить реакцию pH вокруг колоний.

Реакция ДНКаз помогает дифференцировать и идентифицировать непигментированную Serratia marcescens (положительная реакция на ДНКазу) из Klebsiella-Enterobacter (отрицательная реакция на ДНКазу).

HCl является бактерицидным, и микроорганизмы не могут быть восстановлены с поверхности агара после заливуи. Включение в среду красителей, которые могут различать гидролиз ДНК, представляет собой дополнительную модификацию, позволяющую избежать использования кислоты. Толуидиновый синий и метиловый зеленый образуют окрашенные комплексы с полимеризованной ДНК; эти цвета меняются по мере гидролиза ДНК.

Приготовление

Развести 39 г в 1 литре дистиллированной воды и довести до кипения до полного растворения. Стерилизовать автоклавированием при 121 °C в течение 15 минут.

Методика

Засейте чашки, нанеся микроорганизмы на поверхность агара так, чтобы через 18 часов инкубации был виден толстый налёт роста.

Осмотрите чашки на предмет изменения цвета внутри или вокруг колоний, если в среду были добавлены маннит / индикатор или красители. В отсутствие красителей залейте чашки 1 н. HCl и дайте им постоять на столе (крышками вверху) в течение нескольких минут. Ищите зоны расчистки вокруг колоний.

Условия хранения и срок годности

Храните обезвоженную среду при температуре 10-30 °C и используйте до истечения срока годности, указанного на этикетке.
Приготовленную среду хранить при температуре 2-8 °C.

Внешний вид

Сухая среда: сыпучий порошок соломенного цвета.
Готовая среда: гель соломенного цвета.