Раствор нитроцефина - Oxoid™ Nitrocefin Solution, 2х5 флаконов

Нитроцефин - это хромогенный цефалоспорин, разработанный Glaxo Research Limited. Это соединение проявляет быстрое характерное изменение цвета от жёлтого (макс. при pH 7,0 =390 нм) до красного (макс. при pH 7,0 = 486 нм), поскольку амидная связь в бета-лактамном кольце гидролизуется бета-лактамазой. (EC 3.5.2.6); он чувствителен к гидролизу всеми известными лактамазами, продуцируемыми грамположительными и грамотрицательными бактериями. Эта характерная реакция лежит в основе ряда методов, подходящих для диагностического использования.

Нитроцефин оказался чрезвычайно полезным для обнаружения паттернов бета-лактамаз из экстрактов бактериальных клеток в изоэлектрической точке и использовался в исследованиях ингибирования при разработке антибиотиков, устойчивых к бета-лактамазе.

Деградацию нитроцефина следует использовать для быстрого определения систем, инактивирующих бета-лактам, и полученный таким образом результат в большинстве случаев предсказывает результат тестов на чувствительность с бета-лактамными антимикробными средствами.

Однако он не должен полностью заменять традиционные тесты на чувствительность, поскольку на результаты таких тестов также влияют другие факторы, а в некоторых случаях внутренняя резистентность к бета-лактамным антимикробным препаратам не коррелировала с производством бета-лактамазы.

Деградация нитроцефина очень эффективна при обнаружении продуцирующих бета-лактамазы Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae и стафилококков.

Приготовление

Для получения рабочего раствора нитроцефина с концентрацией 500 мг/мл восстановите содержимое одного флакона с лиофилизированным нитроцефином SR0112, добавив содержимое одного флакона (2 мл) жидкость для регидратации SR0112A.

Методика

Регидратируйте нитроцефин, как указано, и используйте этот раствор следующими способами:

1. Метод прямой пластины

Нанесите одну каплю раствора нитроцефина на поверхность колонии. Если изолят является продуцентом бета-лактамазы, колония и окружающая среда быстро становятся красными. Чтобы обнаружить слабый продуцент бета-лактамазы, планшет должен быть инкубирован в течение 30 минут, прежде чем будет зарегистрирован отрицательный результат.

2. Метод слайдов

Нанесите одну каплю раствора нитроцефина на чистое предметное стекло. Используя стерильную петлю, выберите одну колонию из чашки и превратите её в каплю нитроцефина. Результат является положительным, если цвет изменился с жёлтого на красный в течение 30 минут (защитите предметное стекло от высыхания в течение периода ожидания).

3. Способ приготовления на бульоне

Добавьте четыре капли раствора нитроцефина в 1 мл выращенной культуры. Результат является положительным, если цвет изменится на красный в течение 30 минут.

4. Метод сломанной ячейки

Обработайте ультразвуком 1 мл культуры, чтобы разрушить клетки. Добавьте 4 капли раствора нитроцефина. Результат является положительным, если цвет изменится на красный в течение 30 минут.

5 Точечный тест с бумажным диском

Диск из фильтровальной бумаги Whatman № 1 (диаметр 7 см) помещают в чашку Петри и пропитывают раствором нитроцефина (0-5 мл). Эту пропитанную бумагу, как правило, можно использовать в течение одного дня, но её следует хранить вдали от света, чтобы избежать самопроизвольного разрушения. Изолированная колония наносится на пропитанную бумагу петлёй; реакция от розового до красного, развивающаяся в течение 15 минут, указывает на присутствие бета-лактамазы.

Условия хранения и сроки годности

Нитроцефин, особенно в растворе, очень светочувствителен. Раствор можно хранить при -20 ° C до двух недель.

СЛЕДУЕТ ИЗБЕГАТЬ ПРОГЛАТЫВАНИЯ, ВДЫХАНИЯ ИЛИ КОНТАКТА С КОЖЕЙ И ГЛАЗАМИ.

Состав

SR0112C

• 5 ампул лиофилизированного нитроцефина (1 мг) SR0112B
• 5 ампул регидратирующей жидкости (1,9 мл) SR0112A.

BR0063G

• лиофилизированный нитроцефин (50 мг)