Тест на латексную агглютинацию DrySpot ™ Staphytect Plus ™ - DrySpot™Staphytect Plus™Latex Agglutination Test

Дифференциация между коагулазо-положительными и коагулазо-отрицательными стафилококками проводилась с помощью пробирочного теста на коагулазу, который выявляет внеклеточную стафилокоагулазу, или теста на коагулазу на слайдах, который выявляет фактор комкования (связанную коагулазу), присутствующий на поверхности бактериальных клеток.

Около 97% штаммов Staphylococcus auerus обладают как связанной коагулазой, так и внеклеточной стафилкоагулазой.

Белок А обнаружен на поверхности клеток примерно 95% штаммов S. aureus и обладает способностью связывать Fc-часть иммуноглобулина G (IgG).

Было замечено, что некоторые устойчивые к метициллину штаммы S. aureus (MRSA) могут экспрессировать неопределяемые уровни фактора слипания и белка A. Однако было показано, что все эти штаммы обладают капсульным полисахаридом. Капсула может маскировать как белок А, так и фактор слипания, тем самым предотвращая агглютинацию.

DrySpot Staphytect Plus использует синие латексные частицы, покрытые как фибриногеном свиньи, так и кроличьим IgG, включая специфические поликлональные антитела, вырабатываемые против капсульных полисахаридов S. aureus.

Реагент сушат на реакционной карточке. Когда реагент смешивается на карточке с колониями S. aureus, эмульгированными в физиологическом растворе, быстрая агглютинация происходит за счёт реакции между (i) фибриногеном и фактором слипания, (ii) Fc-частью IgG и протеина A, (iii) специфическим IgG и капсульным полисахарид.

Агглютинация может также происходить с другими видами, которые обладают фактором слипания или белком А, такими как Staphylococcus hyicus и Staphylococcus intermediateus. Если ни фактор слипания, ни белок А, ни специфические капсульные полисахариды не присутствуют, агглютинация не произойдёт, и результат будет считаться отрицательным.

Наиболее частыми изолятами стафилококков, отрицательными по коагулазе и белку А, являются Staphylococcus epidermidis.

Методика

1. Добавьте 1 каплю (50 мкл) физиологического раствора (0,85%) в маленькие кольца (внизу каждого овала) как в тестовой, так и в контрольной зоне реакции, следя за тем, чтобы жидкость не смешивалась с высушенными латексными реагентами.
2. С помощью стерильной петли возьмите 5 подозрительных колоний стафилококка среднего размера (эквивалентный диаметру роста 2–3 мм) из чашки с питательной средой и осторожно эмульгируйте в капле физиологического раствора. Убедитесь, что полученная подвеска получилась гладкой.
3. Смешайте суспензию с сухими пятнами Control Latex до тех пор, пока она не станет полностью суспендированной, и распределите по зоне реакции с помощью петли. Выбросьте петлю соответствующим образом.
4. Используя отдельную петлю, проделайте то же самое с Test Latex.
5. Поднимите и покачайте карту в течение 20 секунд и наблюдайте за агглютинацией при нормальном освещении. Не используйте увеличительное стекло.
6. После завершения теста поместите карточки реакции в дезинфицирующее средство.

Положительный результат

Агглютинация синих тестовых латексных частиц происходит в течение 20 секунд. Это предположительно идентифицирует штамм как S. aureus.

Отрицательный результат

Агглютинации не происходит через 20 секунд и в тестовом круге остаётся гладкая синяя суспензия.

Однозначный результат

Незначительная зернистость тестового латекса, сопровождающаяся отсутствием изменений внешнего вида контрольного латекса, следует интерпретировать как неоднозначный результат. Штаммы следует повторно протестировать после пересева на неселективные среды.

Неинтерпретируемый результат

Анализ нельзя интерпретировать, если контрольный реагент показывает агглютинацию. Это указывает на то, что культура вызывает аутоагглютинацию.

Гранулярные или вязкие реакции

Иногда могут наблюдаться гранулированные или вязкие реакции из-за дисперсной природы исследуемого материала. Когда наблюдаются такие реакции, их следует интерпретировать с использованием следующих критериев:

Результат является положительным, когда при использовании тестового реагента наблюдается большее очищение синего фона по сравнению с реакцией контрольного реагента.

Результат будет отрицательным, если нет различий между очисткой синего фона с помощью тестового и контрольного реагентов.

Реакции, происходящие через 20 секунд, следует игнорировать.

Условия хранения и сроки годности

Этот набор должен храниться при температуре от 2 до 25 °C. При хранении в холодной среде дайте пакетам нагреться до комнатной температуры перед открытием, чтобы предотвратить конденсацию влаги на картах. Реагенты DrySpot испортятся и могут дать ложные результаты, если они впитают влагу.

Состав набора

1. Карты с реагентами DrySpot Staphytect Plus.
2. Синие латексные частицы, покрытые как свиным фибриногеном, так и кроличьим IgG вместе со специфическими поликлональными антителами, индуцированными против капсульного полисахарида S. aureus (тестовая зона реакции).
3. Синие частицы латекса, сенсибилизированные инертным глобулином (контрольная зона реакции).
4. 4 пакета, каждый по 10 карт и пакетик, абсорбирующий влагу. На каждой карточке есть 3 тестовых и 3 контрольных зоны реакции. Всего 120 тестов.
5. Пластиковая клипса для хранения открытых пакетов.
6. Брошюра с инструкциями.