Коагулазная плазма 6 мл - Remel™ Coagulase Plasma

Фермент коагулаза действует на компонент плазмы кролика (фактор, реагирующий на коагулазу), вырабатывая тромбиноподобное вещество. Это вещество активирует фибриноген с образованием фибрина, что приводит к образованию фибринового сгустка.

Коагулаза присутствует в двух формах: связанная коагулаза или фактор слипания остаётся прикреплённым к клеточной стенке организма; свободная коагулаза - это внеклеточный фермент, вырабатываемый при культивировании организма в бульоне. Связанная коагулаза обнаруживается в тесте на предметных стёклах, а тест в пробирке обнаруживает связанную и свободную коагулазу.

Приготовление

Регидратируйте лиофилизированную плазму коагулазы стерильной деминерализованной водой в соответствии с объёмом, указанным на этикетке продукта. Переверните флакон и хорошо перемешайте. Внесите аликвоты регидратированного раствора по 0,5 мл в чистые пробирки.

Аликвоты могут быть плотно закрыты и заморожены при -20 °C или ниже на срок до 1 месяца или охлаждены при 2-8 °C в течение 5 дней. Замороженные аликвоты плазмы коагулазы не следует повторно замораживать после размораживания.

Методика

Анализируйте только 18-24-часовые колонии каталаза-положительных грамположительных кокков, которые морфологически характерны для стафилококков, на окрашивании по Граму и на среде в чашках. Тестовый изолят должен расти на неселективной среде, не содержащей высокой концентрации соли.

Примечание. При проведении теста на слайдах убедитесь, что тестовый изолят не самоагглютинирует, наблюдая за комкованием тестового изолята в капле физиологического раствора или деминерализованной воды перед добавлением коагулазной плазмы.

Слайд-тест: (обнаруживает только связанную коагулазу)

1. Капните каплю деминерализованной воды или физиологического раствора на прозрачное чистое предметное стекло.
2. Эмульгируйте полную петлю тестируемого изолята из изолированных колоний, растущих на неселективной среде, в капле воды или физиологического раствора. (Убедитесь, что тестовый изолят не агглютинирует.)
3. Аккуратно смешайте петлю коагулазной плазмы со стафилококковой суспензией.
4. Наблюдайте за немедленным образованием макроскопического осадка в виде белых комков.
5. Реакции слайд-теста должны считываться быстро, поскольку ложноположительные результаты могут появиться при времени реакции более 10 секунд.

Положительный тест - Заметное комкование в течение 10 секунд

Отрицательный тест - Без комкования, суспензия остаётся однородной; подтвердить анализом в пробирке, прежде чем сообщать отрицательный результат

Анализ в пробирке: (обнаружение связанной или свободной коагулазы)

1. Добавьте 0,5 мл плазмы коагулазы в чистую пробирку.
2. Добавьте 0,5 мл чистой бульонной культуры или большую петлю чистой культуры из неселективной среды.
3. Тщательно перемешайте для эмульгирования изолята.
4. Инкубируйте при 35–37 °C на водяной бане или инкубаторе.
5. Каждые 30 минут наблюдайте за свёртыванием, осторожно наклоняя пробирку. Не трясите.
6. Если через 4 часа сгустка не видно, оставьте его на водяной бане или поместите в инкубатор с температурой 35–37 °C на ночь (24 часа).

Положительный тест - Образование сгустка

Отрицательный тест - Нет сгустка, суспензия остаётся однородной

Условия хранения и сроки годности

Храните лиофилизированный продукт в оригинальной упаковке при 2-8 °C до использования. Перед использованием дайте продукту остыть до комнатной температуры. Не инкубируйте перед использованием.