Remel™ Диск с MUG

β-D-глюкуронидаза - это фермент, продуцируемый большинством штаммов E. coli. Этот фермент расщепляет субстрат, 4-метилумбеллиферил-β-D-глюкуронид (MUG), и тем самым производит флуоресцентный конечный продукт, называемый метилумбеллиферон. Это соединение обнаруживается с помощью источника длинноволнового ультрафиолетового света.

В индольном тесте фермент триптофаназа атакует молекулу триптофана на его боковой цепи, оставляя ароматическое кольцо в форме индола. Затем индол обнаруживают путём добавления ρ-диметиламинобензальдегида (реагент Ковача), который даёт красный цвет.

Приготовление

Этот продукт готов к использованию, дополнительная подготовка не требуется.

Методика

Метод A (прямой тест):

1. Поместите диск с MUG в пустую стерильную чашку Петри и добавьте одну каплю деминерализованной воды. В качестве альтернативы диск можно разместить непосредственно на поверхности агара, и в этом случае не потребуется добавлять воду, поскольку влага из среды будет регидратировать диск.
2. Нанесите на диск 2–3 изолированных колонии.
3. Поместите пропитанный водой кусок фильтровальной бумаги в крышку чашки Петри, чтобы обеспечить влажность окружающей обстановки.
4. Инкубируйте в аэробных условиях до 30 минут при 35-37 °С.
5. После инкубации проверьте диск на наличие флуоресценции с использованием длинноволнового ультрафиолетового света (360 нм) в затемнённом помещении. Примечание. Перед добавлением индольного реагента Ковача необходимо интерпретировать реакцию MUG.
6. После считывания флуоресценции на диске добавьте на диск одну каплю индольного реагента Ковача. Немедленно обратите внимание на появление красного цвета.

Метод B (тест с трубкой):

1. Добавьте 0,25 мл деминерализованной воды в чистую пластиковую или стеклянную пробирку.
2. Сделайте густую суспензию тестируемой колонии (3-5 колоний из 18-24-часовой чашки с кровяным агаром) в пробирке. Примечание. Вторая пробирка может быть засеяна известным MUG-отрицательным организмом, чтобы служить в качестве отрицательного контроля и помочь в интерпретации теста.
3. С помощью пинцета поместите диск с MUG в пробирку и энергично встряхните, чтобы обеспечить адекватное вымывание субстрата из окружающей жидкости.
4. Инкубируйте в аэробных условиях в течение 1 часа при 35–37 °C.
5. После инкубации проверьте пробирку на флуоресценцию, используя длинноволновый ультрафиолетовый свет (360 нм) в затемнённом помещении. Примечание. Перед добавлением индольного реагента Ковача необходимо интерпретировать реакцию MUG.
6. После определения флуоресценции в пробирке добавьте в пробирку 2–3 капли индольного реагента Ковача и перемешайте. Немедленно обратите внимание на появление красного цвета.

Интерпретация результатов:

MUG

Положительный результат: синее окрашивание, флуоресценция

Отрицательный результат: отсутствие флуоресценции

IND

Положительный результат: красное окрашивание на диске или в трубке

Отрицательный результат: отсутствие красного окрашивания на диске или в трубке

Условия хранения и сроки годности

Храните продукт в оригинальной упаковке при 2-8 °C до истечения срока годности. Перед использованием дайте продукту остыть до комнатной температуры (20-25 °C). Защищайте продукт от света, так как он светочувствителен.

Состав

• 4-метилумбеллиферил-β-D-глюкуронид
• Триптофан