Oxoid™ O.B.I.S. campy

O.B.I.S. Campy-тест позволяющий отличить виды Campylobacter, Helicobacter и Arcobacter от всех других грамотрицательных организмов.

В отличие от других грамотрицательных организмов, Campylobacteraceae не обладают ферментом L-аланиламинопептидазой (L-ALA). O.B.I.S. Campy -тест включает в себя экспресс-тест для обнаружения этого фермента и реагент для лизиса по Граму.

Сначала необходимо провести окраску по Граму. Этот тест позволяет различать грамположительные и грамотрицательные бактерии.

Тест проводится на предметном стекле. Гидроксид натрия (0,5 М) используется для лизиса клеточной стенки грамотрицательных организмов и высвобождения ДНК. ДНК образует «нить», которую можно увидеть, когда петля поднимается с поверхности предметного стекла. Эта реакция не происходит с грамположительными организмами.

После того, как микроорганизм был идентифицирован как грамотрицательный, можно проводить тест на L-ALA. Каждая O.B.I.S. карта реакции пропитана субстратом L-ALA (L-аланил-7-амино-4-метилкумарин) в каждой из шести реакционных зон. Кислый раствор диметиламиноциннамальдегида (DMAC) используется в качестве проявителя цвета.

Если субстрат был гидролизован организмом, свободный 7-амино-4-метилкумарин будет соединяться с проявителем с образованием пурпурного основания Шиффа.

Методика

Лизис по Граму:

1. Возьмите 10 мкл 0,5 М раствора гидроксида натрия (белая бутылка с плоской крышкой) и поместите на чистое предметное стекло.
2. Используя стерильную петлю, возьмите небольшое количество материала с чашки Петри.
3. Смешайте образец с NaOH на предметном стекле в течение одной минуты.
4. Периодически осторожно поднимайте петлю из смеси, чтобы проверить наличие «нити» между петлей и смесью.
5. Запишите результат:

Положительный результат характеризуется вязкостью смеси и наличием нити ДНК. Это говорит о том, что организм грамотрицательный.

Отрицательный результат характеризуется образованием суспензии клеток без нитей и указывает, что микроорганизм грамположительный. Этот тест также может быть проведён с использованием 0,5 М раствора гидроксида калия (КОН). В качестве альтернативы можно использовать традиционное окрашивание по Граму для определения статуса организма по Граму.

L-ALA тест:

После того, как микроорганизм был идентифицирован как грамотрицательный, можно проводить теста с L-ALA.

1. Извлеките одну из тестовых карточек из пакета.
2. Используя лопастной конец неиспользованной пластиковой пасты, перенесите эквивалент колоний диаметром 5x1 мм с чашки в тестовую зону.
3. Распределите образец по зоне реакции (внутри круга) тестовой карточки.
4. Выдавите одну каплю O.B.I.S. Кэмпи-буфер (флакон-капельница с белым колпачком) на каждую из засеянных реакционных зон.
5. Подождите 30 секунд.
6. Выдавите одну каплю O.B.I.S. Проявитель DMAC (фиолетовый колпачок) на каждую из засеянных реакционных зон.
7. Появление пурпурного цвета вокруг исходного материала колонии в течение 20 секунд является положительной реакцией на L-ALA. Положительная реакция указывает на то, что организм не относится к видам Campylobacter, Helicobacter или Arcobacter.
   Если в течение 20 секунд вокруг исходного материала колонии не появляется окраска, это отрицательная реакция. Отрицательная реакция указывает на то, что организм является предполагаемым видом Campylobacter, Helicobacter или Arcobacter.

Условия хранения и сроки годности

Храните продукт в оригинальной упаковке при 2-8 °C до использования. Перед использованием дайте продукту нагреться до комнатной температуры (20-25 °C).

Состав

1. ID0803M O.B.I.S. Тестовые карточки (10 шт).
2. ID0804M O.B.I.S. Буфер (7 мл).
3. ID0221M O.B.I.S. Раствор DMAC (7 мл 0,5% диметиламинноциннамальдегида в 1M соляной кислоте).
4. ID0802M 0,5 М раствор гидроксида натрия (6 мл).
5. ID0989 Лопатка (60 шт).
6. Брошюра с инструкциями.