Нитратный диск Remel™ - Remel™ Nitrate Disc

Индоксилацетатный диск Thermo Scientific ™ Remel используется для быстрой идентификации и дифференциации Campylobacter, Wolinella и Helicobacter.

Бактериальная эстераза высвобождает индоксил из индоксилацетата, который спонтанно реагирует с образованием индиго в присутствии кислорода. О положительном результате свидетельствует появление синего цвета.

Организмы, продуцирующие нитратредуктазу, могут восстанавливать нитраты до нитритов. Нитраты служат источником азота для многих бактерий. Молибдат стимулирует синтез нитратредуктазы.

Первым шагом в использовании нитрата является восстановление до нитрита путём удаления одной молекулы кислорода. Нитрит соединяется с сульфаниловой кислотой и амино-2-нафталином с образованием конечного продукта красного цвета. Некоторые организмы способны дополнительно восстанавливать нитрит до азота, что приводит к бесцветному результату.

Для подтверждения бесцветного результата необходимо провести дополнительный тест на наличие непрореагировавшего нитрата. Цинковая пыль катализирует реакцию нитрата на нитрит. Поэтому красный цвет при добавлении цинковой пыли указывает на присутствие непрореагировавшего нитрата.

Методика

1. Используйте установленные лабораторные процедуры для обработки анаэробных организмов.
2. Дайте диску (дискам) уравновеситься до комнатной температуры.
3. Используйте чашку с неселективным анаэробным кровяным агаром [например, анаэробный восстанавливаемый кровяной агар (REF 01060) или кровяной агар с бруцеллами с гемином и витамином К (REF 01254)].
4. Проведите тестирование подозреваемых организмов на первичной анаэробной культуре или используйте чистую субкультуру из анаэробного изолята.
5. Выберите одну хорошо изолированную колонию и несколько раз нанесите штрихи в первом квадранте чашки вперёд и назад, чтобы обеспечить равномерный рост газона.
6. Поместите нитратный диск на сильно засеянную часть планшета, используя пинцет. Последующие диски для предположительной идентификации анаэробов могут быть помещены на пластину.
7. Тестирование на аэротолерантность той же самой колонии, которая использовалась для теста диска, должно быть выполнено в это же время, если не установлено ранее.
8. Инкубируйте планшет в анаэробных условиях при 35–37 ° C в течение 24–48 часов (до тех пор, пока не станет очевидным хороший рост организма).
9. Снимите диск с поверхности чашки и поместите в чистую чашку Петри перед добавлением реагентов.
10. Добавьте по одной капле каждого из анаэробных нитратных реагентов A и B на диск. Если в течение 3-5 минут цвет не проявляется, добавьте небольшое количество цинковой пыли и подождите 5 минут. Обратите внимание на изменение цвета.

Положительный результат - появление красного цвета после добавления анаэробных нитратов A и B; отсутствие изменения цвета после добавления цинковой пыли

Отрицательный тест - цвет не изменился после добавления анаэробных нитратов A и B; появление красного цвета после добавления цинковой пыли.

Условия хранения и сроки годности

Этот продукт готов к использованию, дополнительная подготовка не требуется. Храните продукт в оригинальной упаковке при 2-8 ° C до истечения срока годности, указанного на упаковке. Перед использованием дайте продукту нагреться до комнатной температуры. Не инкубируйте перед использованием.

Приготовление

Этот продукт готов к использованию, дополнительная подготовка не требуется.

Методика

1. Исследуются образцы чистой культуры после роста в течение 18-72 часа.
2. Используя пинцет, поместите диск с индоксилацетатом на чистое предметное стекло микроскопа. Регидратируйте диск одной каплей (20-40 мкл) деминерализованной воды; не перенасыщать. В качестве альтернативы диск можно поместить прямо на чашку Петри с агаром, где он будет поглощать влагу из среды.
3. С помощью палочки-аппликатора инокулируйте диск несколькими колониями тестируемой культуры.
4. Инкубируйте диск при комнатной температуре в течение 20 минут.
5. Проверьте наличие синего или сине-зелёного цвета.

Условия хранения и сроки годности

Храните продукт в оригинальной упаковке при 2-8 °C до истечения срока годности. Перед использованием дайте продукту достигнуть комнатной температуры 20-25 °C. Беречь продукт от попадания солнечных лучей.

Состав

• Нитрат калия
• Молибдат натрия