Набор RapID™ NF PLUS System

Приготовление инокулята:

1. Перед использованием в системе тестовые организмы необходимо выращивать в чистой культуре и исследовать с помощью окрашивания по Граму и провести оксидазный тест.

Примечание. Оксидазный тест следует интерпретировать с осторожностью при использовании роста бактерий из дифференциальных агаров, содержащих красители, которые могут помешать интерпретации.

2. Тестируемые организмы могут быть выделены из различных селективных и неселективных агаров. Рекомендуются следующие типы сред: триптиказо-соевый агар (TSA) с 5% овечьей кровью или без неё; Питательный агар; Шоколадный агар; МакКонки Агар.

Примечания:

• Некоторые среды, содержащие или дополненные моно- или дисахаридами, не рекомендуются, так как они могут подавлять гликолитическую активность и снижать селективность теста.

• Чашки, используемые для приготовления посевного материала, предпочтительно должны быть возрастом 18-24 часа. Медленнорастущие изоляты можно тестировать на 48-часовых планшетах.

• Использование носителей, отличных от рекомендованных, может снизить производительность теста.

3. С помощью ватного тампона или инокуляционной петли приостановите достаточный рост культуры чашки с агаром в RapID Inoculation Fluid (1 мл), чтобы добиться визуальной мутности, равной, по крайней мере, стандарту мутности по Макфарланду №1 или его эквиваленту, но не выше # 3 Стандарт МакФарланда или аналог.

Примечания:

• Суспензии, значительно менее мутные, чем стандарт МакФарланда №1, будут вызывать аномальные реакции.

• Бактериальные суспензии, более мутные, чем стандарт МакФарланда №1, не влияют на характеристики теста и рекомендуются для исходных культур и штаммов контроля качества. Однако суспензии, приготовленные с мутностью, значительно превышающей стандарт МакФарланда № 3, могут ухудшить характеристики теста.

• Суспензии следует тщательно перемешать и при необходимости встряхнуть.

• Суспензии следует использовать в течение 15 минут после приготовления.

4. В чашку с агаром можно внести посев на чистоту и любые дополнительные испытания, которые могут потребоваться, с использованием полной петли тестовой суспензии из пробирки с посевной жидкостью. Инкубируйте планшет 18-24 часа при 35-37 ° C.

Засев панелей:

1. Отогните крышку панели над портом посева, потянув за язычок с надписью «Очистите для посева» вверх и влево.

2. С помощью пипетки аккуратно перенесите все содержимое пробирки с посевной жидкостью в верхний правый угол панели. Закройте инокуляционный порт на панели, вернув на место отрывной язычок.

3. После добавления тестовой суспензии и, удерживая панель на ровной поверхности, наклоните панель назад от реакционных полостей примерно на 45 градусов.

4. Откинув панель назад, осторожно покачивайте панель из стороны в сторону, чтобы равномерно распределить посевной материал по задним перегородкам, как показано ниже.

5. Поддерживая ровное горизонтальное положение (лучше всего достигается прижиманием верхней части стола к дну реакционной полости), медленно наклоняйте панель вперёд в направлении реакционных полостей, пока посевной материал не потечёт вдоль перегородок в реакционные полости. Это должно удалить весь посевной материал из задней части панели.

Примечание. Если панель наклоняется слишком быстро, в стыке тестовой полости может скапливаться воздух, что ограничивает движение жидкости.

6. Верните панель в горизонтальное положение. При необходимости осторожно постучите по панели на столе, чтобы удалить воздух, застрявший в полостях.

Примечания:

• Осмотрите тестовые полости, которые не должны иметь пузырьков и быть равномерно заполненными. Незначительные неровности заполнения испытательных полостей допустимы и не повлияют на выполнение теста. Если панель сильно не заполнена, необходимо засеять новую панель, а неправильно заполненную панель выбросить.

• Завершите инокуляцию каждой панели, получающей посевную жидкость, перед инокуляцией дополнительных панелей.

• Не позволяйте посевному материалу оставаться в задней части панели в течение длительного времени без завершения процедуры.

Инкубация панелей:

Инкубируйте засеянные панели при 35-37 °C в инкубаторе без CO₂ в течение 4 часов. Для простоты использования панели можно инкубировать в инкубационных лотках из ДСП, поставляемых с набором.

Примечание. При желании после 4-часового инкубационного периода и до добавления каких-либо реагентов панели RapID NF Plus можно поместить в холодильник (2-8 °C) на ночь для чтения на следующее утро.

Оценка результатов:

Панели RapID NF Plus содержат 10 реакционных полостей, которые, помимо оксидазы, дают 18 результатов тестов. Полости для испытаний с 4 по 10 являются бифункциональными и содержат два отдельных теста в одной полости. Бифункциональные тесты сначала оцениваются до добавления реагента, что дает первый результат теста, а затем та же полость снова оценивается после добавления реагента, чтобы получить второй результат теста. Бифункциональные тестовые полости, для которых требуется реагент RapID NF Plus, обозначены первым тестом над полосой и вторым тестом под полосой. Бифункциональный тест 9, для которого требуется реагент RapID Spot Indole Reagent, обозначен линией под тестом, требующим реагента, IND. Бифункциональный тест 10, для которого требуется реагент RapID Nitrate A Reagent, обозначается рамкой, обведенной вокруг необходимого реагента NO₃.

1. Удерживая панель RapID NF Plus на столе, снимите крышку с этикеткой над реакционными полостями, потянув нижний правый язычок вверх и влево.

2. Без добавления каких-либо реагентов прочтите и оцените полости от 1 (ADH) до 10 (GLU) слева направо, используя руководство по интерпретации, представленное в таблице 2. Запишите результаты теста в соответствующие поля в форме отчёта с использованием теста. код над полосой для бифункциональных тестов.

Примечание: запишите цвет полости 10 (GLU) в отведённом для этого месте в форме отчёта. Синий указывает на подщелачивание, зелёный - на окисление, жёлтый - на ферментацию. Эта информация может быть полезна как дополнительная характеристика при разрешении вероятностных перекрытий.

3. Добавьте в указанные полости следующие реагенты:

• Добавьте 2 капли реагента RapID NF Plus в полости с 4 (PRO) по 8 (BANA).

• Добавьте 2 капли реагента RapID Spot Indole Reagent в полость 9 (URE / IND).

• Добавьте 2 капли реагента RapID Nitrate A в полость 10 (GLU / NO₃).

Примечание. Следует использовать только реагент RapID Spot Indole Reagent. Реагенты Ковача или Индол Эрлиха не дадут удовлетворительных результатов.

4. Подождите не менее 30 секунд, но не более 3 минут для проявления цвета. Прочтите и оцените полости с 4 по 10. Запишите оценки в соответствующие поля формы отчёта, используя коды под полосой для бифункциональных тестов.

5. Запишите реакцию оксидазы на исследуемый изолят в поле в форме отчета.

6. Ссылайтесь на микрокод, полученный в форме отчета в ERIC, для идентификации.

Реагенты RapID NF Plus System, RapID Nitrate A и RapID Spot Indole должны храниться в исходных контейнерах при 2–8 °C до использования. Перед использованием дайте продуктам нагреться до комнатной температуры. НЕ меняйте местами реагенты в разных системах RapID. Удалите только то количество панелей, которое необходимо для тестирования. Закройте пластиковый пакет и быстро верните его к температуре 2-8 °C. Панели необходимо использовать в тот же день, когда они были сняты с хранения. Жидкость для посева RapID должна храниться в оригинальном контейнере при комнатной температуре (20-25 ° C) до использования.

+ положительный; - отрицательный; V переменная

Реагент RapID NF Plus

ρ-Диметиламиноциннамальдегид 0,05 г/л

Жидкость для быстрого посева (R8325102, продаётся отдельно) (1 мл/флакон)

KCl 6,0 г

CaCl2 0,5 г

деминерализованная вода 1000,0 мл

Реагент RapID Nitrate A (R8309003, продаётся отдельно). (15 мл/флакон)

сульфаниловая кислота 8,0 г

ледяная уксусная кислота 280,0 мл

деминерализованная вода 900,0 мл

Индоловый реагент RapID Spot (R8309002, продаётся отдельно) (15 мл/флакон)

ρ-диметиламиноциннамальдегид 10,0 г

соляная кислота 100,0 мл

деминерализованная вода 900,0 мл