Агар триптонно-желчный с Х-глюкуронидом – Tryptone Bile X-Glucuronide, 2,5 кг

Агар триптонно-желчный с Х-глюкуронидом содержит в составе хромогенный агент - X-глюкуронид, который определяет активность глюкуронидазы, синтезируемой Escherichia coli. Однако примерно 3-4% Escherichia coli являются глюкуронидазо-отрицательными, особенно штаммы Escherichia coli O1575.

В отличие от MUG, где флуофор вымывается из клетки в окружающий агар, высвободившийся хромофор в среде ТВХ нерастворим и накапливается внутри клетки, что обеспечивает лёгкую идентификацию цветных колоний.

Хромоген в среде ТВХ представляет собой 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-D-глюкуронид (X-глюкуронид) и является мишенью для этого фермента. Клетки Escherichia coli способны абсорбировать этот комплекс в неповрежденном виде, а внутриклеточная глюкуронидаза расщепляет связь между хромофором и глюкуронидом. Освободившийся хромофор окрашивается и накапливается внутри клеток, в результате чего колонии Escherichia coli окрашиваются в синий / зелёный цвет.

Приготовление

Развести 36,6 г агара ТВХ в 1 литре дистиллированной воды. Стерилизовать автоклавированием при 121 °C в течение 15 минут. Охладить до 50 °C и разлить среду в стерильные чашки Петри.

Методика

Просушите поверхность агара в подготовленных стерильных чашках Петри. Разведите образец пищи в соответствии с применяемым методом, например 1:10 с разбавителем (CM0733). Гомогенизируйте.

1. Нанести пипеткой 0,1 мл гомогената на планшет и распределить по поверхности стерильным стеклянным шпателем. Инкубируйте планшеты в течение 24 часов при 37 °C.
2. Нанести пипеткой 0,5 мл гомогената на планшет и распределить по поверхности стерильным стеклянным шпателем. Инкубируйте планшеты в течение 4 часов при 30 °C, затем 18-24 часов при 44 °C.
3. Поместите целлюлозную мембрану на поверхность планшета, приготовленного на основе модифицированной минералами глутаматной среды (CM0607). Нанесите пипеткой на мембрану 1 мл гомогената. Инкубируйте 4 часа при 37 °C. Перенесите мембрану на планшет, подготовленный ТВХ, и инкубируйте в течение 18-24 часов при 44 °C.
4. Внесите пипеткой 1 мл гомогената в стерильную чашку Петри. Добавить среду TBX, охлаждённую до 45 °C. Хорошо перемешайте и дайте застыть. Инкубируйте 18-24 часа при 44 °C. Если есть подозрение на присутствие стрессированных клеток, предварительно инкубируйте планшеты в течение 4 часов при 37 °C.

Умножьте количество синих / зелёных колоний на коэффициент разведения и выразите результат как количество Escherichia coli на грамм пищи.

Условия хранения и сроки годности

Сухую среду хранить при температуре 10-30 °C и использовать до истечения срока годности, указанного на этикетке.

Приготовленную среду можно хранить при 2-8 °C.

Внешний вид

Сухая среда: сыпучий порошок соломенного цвета.

Готовая среда: гель соломенного цвета.